更新时间：2019-02-11, 泉源：国家实验动物专家委员会简报 2019年第8期2058
编者：1988年《实验动物治理条例》宣布实验，在实验动物事情规范化、法制化治理，包管实验动物和动物实验的质量，推动我国科技生长和民生包管等方面施展了主要作用 。特殊是在实验动物资源标准化、新品种/品系开发和动物模子创造方面，取得了令人瞩目的效果 。
资源增量是实验动物科技生长的焦点使命，是实验动物对生命科学研究提供支持和效劳的基础和包管 。自上世纪80年月以来，在以中国农业科学院哈尔滨兽医研究所研究团队为代表的科研机构，通过国际相助和自主研发，建设了许多新的品系，开展质量标准化研究，建设了对病原微生物敏感、遗传性能稳固和生产性能优异的禽类种群，为禽类疾病的研究和疫苗生产提供了及格的试验质料，取得多项开创性效果 。
为此，借“科技资讯”之窗，先容我国实验动物科技事情者所作的事情及取得的应用效果 。
实验用禽类动物种群（鸡、鸭）的建设与标准化
韩凌霞 孟兴 佟相慧 陈洪岩
（中国农业科学院哈尔滨兽医研究所实验动物与较量医学团队，国家禽类实验动物中心，黑龙江省实验动物与较量医学重点实验室，哈尔滨，150069）
禽类实验动物，广义指用于实验动物的多种禽类，包括鸡、鸭、鹌鹑、鸽、鹅等，但真正实现标准化的，只有无特定病原体（SPF）鸡和SPF鸭，是生命科学领域中从事高水平科研和多种人畜生物制品生产、判断所不可缺少和无法替换的实验动物和原质料，与人类康健和生物清静亲近相关 。下面就我国SPF鸡和SPF鸭的建设与标准化做一简朴回首 。
一、鸡、鸭的主要生物学特征
从动物分类学上，鸡和鸭均属鸟纲（Aves），鸡属鸡形目（Galliformes）、雉科（Phasianaidae）、鸡属（Gallus），鸭属雁形目（Anseriformes）、鸭科（Anatidae）、河鸭属（Anus） 。红色原鸡（Gallus bankiva）是现代家鸡的祖先，家鸭起源于绿头鸭（Anas Platyrhynchos Linnaeus）和斑嘴鸭（Anas poecilorhyncha Forster） 。
SPF鸡基本都选用产白壳蛋的鸡，大都拥有白来航血统 。白来航鸡体型小而秀气，全身紧贴白色羽毛，单冠，喙、跖、皮肤均为黄色，耳叶白色，性成熟早，产蛋量高，蛋壳白色，无就巢性 。滋生潜力大，终年产蛋 。消化系统由口腔、食道、嗉囊、胃、小肠、大肠和泄殖腔组成 。在食道和胃之间有球形膨大的嗉囊，胃分为腺胃和肌胃，腺胃渗透胃液，用于消化卵白质，肌胃肌肉蓬勃，可以磨碎食物，有利于消化 。小肠由十二指肠、空肠、回肠组成，空肠与回肠长度大致相等，无显着界线 。大肠包括一对盲肠和直肠 。直肠最后和尿生殖道配合启齿于泄殖腔 ；泄殖腔被两个环行褶分为粪道、泄殖道、肛道 。无膀胱，尿液天生后直接排入泄殖腔 。泄殖腔背侧特有的法氏囊，是B淋巴细胞成熟场合，也是人类发明B淋巴细胞的地方 。血量约为体重的8%左右，常用于制备禽病特异性阳性血清 。鸡红细胞呈椭圆形，外貌保存对州病毒的受体，是运用血凝试验的最普遍动物 。红细胞有大的细胞核，利于遗传学研究 。鸡的组织相容性复合体（MHC）称为B复合体，位于第16号染色体上，连锁组成一个单倍型，已命名多个B单倍型，具有共显性遗传特征 。鸡对特定疫病的敏感性与遗传配景更亲近，适于开展免疫遗传学研究 。
鸭比鸡更神经质，性急怯弱，易受外界突然的刺激而惊群，尤其对人、畜及无意泛起的色彩、声音、强光等刺激均畏惧而反应强烈 。生涯能力强，对倒运的情形条件和应激因素有较强的顺应能力，对家禽常见的熏染病，按自然熏染发病的种类，鸭比鸡少1/3左右，适于人类疫苗的生产和磨练，以及举行种属屏障相关研究[1] 。
二、SPF鸡的培育与标准化研究
（一）SPF鸡的培育
我国SPF鸡群的培育始于上世纪80年月 。中国农业科学院哈尔滨兽医研究所、山店主禽研究所、中国兽医药品监察所、北京市兽医生物药品厂、北京实验动物中心等单位先后最先培育SPF鸡群 。以后，SPF鸡种蛋在科研和疫苗生产中的应用逐步扩大 。中国农业科学院哈尔滨兽医研究所使用中国——澳大利亚相助项目和世行农业科研二期项目建成“SPF 禽饲养与保种设施”，在科技部平台试点项目的资助下，先后从澳大利亚和美国等地引进SPF鸡种蛋，应用多年，后因种卵世代较高，近交退化严重，无法传代 。90年月初，从北京引进海内优质培育蛋鸡品种10个家系，最先自行净化，经由经疫病净化，生物学敏感性实验和选育培育试验等手艺，按期举行疫病监测并镌汰抗原阳性个体，净化特定的病原和抗体，最终获得了扫除禽白血病病毒等 18 种特定病原和抗体，对新城疫病毒等 9 种病原微生物敏感，遗传性能稳固和生产性能优异的BWEL-SPF 种鸡群[2-6] 。MHC单倍型鸡不但影响对多种疫病的敏感性[7]，对疫苗制品的产量[8]，还与产蛋性能相关[9] 。我国在本世纪初以BWEL-SPF鸡为基础率先开展培育海内MHC单倍型鸡，至2015年培育乐成6个MHC单倍型SPF鸡[10] 。
（二）SPF鸡的标准化
1.微生物学质量标准
微生物学质量是SPF鸡群培育和治理的基本要求 。各国和国际上对SPF鸡群的疫病监测种类没有统一标准,但都着重控制经卵笔直熏染的熏染� 。杭Π琢 ⒓Χ局г宀 ⒒耗抑г搴颓莅籽� 。2008年12月31日，由中国国家质量监视磨练检疫总局和中国国家标准化治理委员会团结宣布了SPF鸡微生物学监测系列标准“GB/T 17999.1-10—2008”，划定了19种微生物学监测项目及其检测手艺，包括检测样品、检测项目、检测程序、检测规则、效果判断和检测报告等，以及与其配套的9个检测手艺标准，包括琼脂扩散试验（AGP） ；多重荧光免疫（MFIA） ；血凝抑制试验（HI） ；血清平板凝集试验（SPA） ；胚敏感试验（EST） ；病原体疏散（IA） ；血清中和试验（SN） ；间接免疫荧光试验（IFA） ；酶联免疫吸附试验（ELlSA） ；试管凝集试验（TA） ；临床视察（CO） ；：反转录-聚合酶链式反应（RT-PCR）和聚合酶链式反应（PCR） 。与外洋差别的是，未明确检测用的病原菌、毒株 。
2.遗传学质量标准
SPF鸡品系差别会导致细胞的差别生长特征和对麻疹病毒敏感性的差别[11] 。广东省标准DB44/60-94实验动物啮齿类和鸡的遗传，划定了“鸡的近交系是指兄妹一连交配11代以上育成的品系，近交系数90％以上” 。国际建设单倍型或近交系实验用鸡的遗传学标记所有都是凭证MHC的多态性 [12]，国家禽类实验动物种子中心选育乐成的MHC单倍型鸡在MHC焦点区域的BF、BLB[13]和BG[14]基因切合国际对的标准遗传学特征[15] 。2017年中国实验动物学会宣布了整体标准T/CALAS 16-2017实验动物SPF鸡遗传质量控制，划定了SPF鸡的滋生和遗传质量监测要领，适用于关闭群和MHC单倍型鸡群的遗传质量控制 。
3.配合饲料标准
SPF鸡的饲育的目的是为了在包管无微生物污染的条件下生产无疫病抗体、无抗生素残留、活性强的受精卵，而商品化蛋鸡养殖场追求的是纯粹高产蛋率 。美国LabDiet公司将实验用鸡的饲喂阶段划分为育雏育成和产蛋两个阶段，澳大利亚将SPF鸡的饲料标准分为幼雏（0-6周龄）、中雏（6-20周龄）和成鸡（20周龄以上），划定了粗卵白、粗脂肪、粗纤维、食盐、维生素A和维生素D的含量 。整体标准“T/CALAS 15-2017实验动物SPF鸡配合饲料”划定了SPF鸡的配合饲料的质量要求、营养因素测定要求、卫生要求、检测规则以及标签、包装、贮存和运输要求，适用于SPF鸡的配合饲料的质量控制 。凭证0-8周龄、9-18周龄、19-24周龄和25周龄以上（至产蛋量下降为5%）分为育雏期、育成期、产蛋前期和产蛋岑岭期，划定了8种通例营养因素（水分、代谢能、粗卵白、钙、总磷、有用磷、钠和亚油酸）、12种氨基酸（赖氨酸、蛋氨酸、蛋氨酸/胱氨酸、精氨酸、组氨酸、苏氨酸、色氨酸、苯丙氨酸、苯丙氨酸/酪氨酸、缬氨酸、亮氨酸和异亮氨酸）、13种维生素（A（视黄醇）、D3（胆钙化醇）、E（生育酚）、K、B1、B2（核黄素）、B5（泛酸）、B3（烟酸）、B12（钴胺素）、胆碱、生物素、B9（叶酸）和B6（吡哆醇））、6种微量矿物元素（锰、锌、铁、铜、碘和硒）等指标的最低值[16] 。
4.情形设施
“GB14925-2010实验动物情形及设施”对实验动物鸡的生产和实验的屏障情形、实验的隔离情形举行了划定，包括温度、最大日温差、相对湿度、最小换气次数、动物生涯处气流速率、相通区域的最小静压差、空气清洁度、沉降菌最大平均浓度、氨浓度、噪声、照度和昼夜明暗交替时间等手艺指标，基本涵盖了SPF鸡的生产和实验设施的情形要求 。SPF鸡饲养室的空气清洁度为7级，即≥5μm的尘粒数在293个/m3-2930个/m3 之间 ；沉降菌最大平均浓度不大于3个CFU/0.5h?φ90 mm平皿 。
5.饲养治理指南
整体标准“T/CALAS 38-2017 实验动物 SPF鸡和SPF鸭饲养治理指南”划定了SPF鸡场的基本条件、情形与设施、引种、运输、饲养及生产治理、放弃物及遗体处置惩罚、问题处置惩罚的要求，将设施按功效区分为辅助区和生产区，生产区应设有孵化室、储蛋库、易服室和隔离检疫室，处于屏障情形 。使用后的隔离器应接纳加热硅油和多聚甲醛蒸汽消毒 ；应用细砂纸或40℃的0.1%新洁尔灭溶液擦拭去除蛋外貌的污物 ；育雏早期情形温度应随日龄而调解 ；建议接纳本交方法交配，镌汰人工受精环节的污染 ；一样平常在4周龄举行遗传学质量监测 ；20-22周龄时留种禽 ；病原学质量监测凭证GB/T 17999.1-2008举行 ；一样平常在7～10日龄时断喙（上喙1/2处，下喙1/3处），刚断喙时可增添饲料厚度，直至伤口愈合 ；饲喂历程要只管轻柔清静，阻止突然噪声 ；随时视察产蛋母鸡背部受伤情形，实时用紫药水处置惩罚，避免其它禽群起啄之 。
6.运输
2018年1月黑龙江省标准“DB23/T 2057.8-2017实验动物运输隔离器通用手艺要求” 最先实验，划定了包括禽类在内的实验动物运输隔离器通用手艺要求的术语和界说、结构、质料要求、手艺要求、检测，适用于运输小、中、大型清洁、无特定病原体、无菌（含悉生）级实验动物的隔离器 。体重小于2 kg的鸡，笼内最小高度0.4 m，每只鸡的底板面积0.02 m2-0.12 m2 ；体重大于2 kg的鸡，笼内最小高度为0.6 m，每只鸡的底板面积为0.15 m2. 。
三、SPF鸭的培育和标准化
（一）SPF鸭的培育
实验动物鸭可用于心理学、病毒学、内渗透学、营养学、药埋学等研究，用作建设肝炎动物模子，也是疫苗的研制与生产的主要质料，特殊对禽流感、小鹅瘟、新城疫、鸡传支、呼肠孤等疫苗有主要意义 。中国农业科学院哈尔滨兽医研究所从2005年最先培育SPF鸭，以我国优异地方培育品种绍鸭百壳I号为基础，所有生命周期都饲养于正压隔离器中，经由种卵灭活疫苗免疫、阻断物流/人流污染、钴60辐照饲料和酸化饮水等步伐，以闭锁群方法滋生 。经太过子遗传学剖析[17]、组织学剖析[18]、疫病敏感性试验[19]、生化位点[20]、剖解学数据测定[21]、心理生化数据测定[22]和MHC区域的遗传学结构剖析[23]，已成为成熟、稳固的SPF鸭群，在禽病研究中施展了主要的作用 。至今已扫除了鸭病毒性肠炎等9种疫病，是海内唯一的SPF种鸭群，命名为HBK鸭 。凭证与MHC焦点区域的tap2基因选育出4个单倍体型HBW/B1、B2、B3和B4 。
（二）SPF鸭的标准化
1.微生物学质量控制
“T/CALAS 18-2017 实验动物 SPF鸭微生物学监测总则”划定了SPF鸭的微生物学种类，及其检测程序、检测规则、效果判断和检测报告等要求 。适用于SPF鸭和鸭胚的微生物学控制 。划定扫除的疫病项目包括9种，沙门菌熏染、禽霍乱、鸭熏染性浆膜炎、网状内皮增生病减蛋综合征、鸭病毒性肝炎、鸭病毒性肠炎、禽流感和新城疫 。检测样品包括鸭血清、全血、鸭胚、咽拭子和泄殖腔拭子 。首次检测从4-8周龄最先 。SPF鸭每世代至少监测2次 。对所有饲养单位的鸭举行所有项目的检测，每个饲养单位按15％的比例抽样 。所有项目的检测效果均为阴性者，判为及格 ；若有1项（含1项）以上为阳性，则判为缺乏格 。
2.遗传学质量控制
“T/CALAS 37-2017 实验动物 SPF鸭遗传学质量监测”适用于关闭群鸭和MHC单倍型鸭的遗传学质量控制，划定了关闭群和MHC单倍型的交配方法，类似于SPF鸡的遗传学质量监测，差别的是单倍型的检测以tap基因的纯化性为依据 。
3.配合饲料标准
SPF鸭与商品蛋鸭在饲养情形和使用目的迥异 。最近公布的“T/CALAS 17-2017 实验动物SPF鸭配合饲料”是参照美国NRC（1994）和我国商业行业标准SB/T 10262-1996制订的，将SPF鸭以0-8周龄、9-19周龄、20-30周龄和31周龄至产蛋率下降为5%，划分作为育雏期、育成期、产蛋前期和产蛋岑岭期 。划定的指标与SPF鸡相同 。
4.饲养治理
SPF鸭的饲养治理同样包括在“T/CALAS 38-2017 实验动物 SPF鸡和SPF鸭饲养治理指南”里 。
四、实验用禽类（鸡、鸭）实验动物种群的建设与意义
2006年天下只有7家SPF鸡卵生产企业[24]，2006年最大生产能力1245万枚，至2015 年天下已有10个省( 自治区、直辖市) 生产鸡胚，主要集中在山东、北京、浙江和黑龙江，SPF鸡胚的生产量达4万万余枚[25] 。
SPF鸡和SPF鸭被大宗用于病毒的疏散、纯化、滴定、拯救，以及禽病疫苗的免疫效果评估、禽病原微生物的致病分子机制等方面的研究事情，仅禽流感研究每年都要消耗万余枚鸡胚 。取得了丰富的效果 。优良的SPF鸡胚为973、863、科技支持妄想、国家自然基金等多个项目的顺遂举行提供了必需的实验质料，为各项科研事情顺遂举行提供了扎实的物质基础和条件支持 。通过慢病毒载体制备转基因鸡的研究也已取得了突破性希望，信托随着品种品系数目和质量的一直增添，实验用禽类将在生命科学领域饰演更主要的角色 。
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