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脓毒症被界说为由宿主对熏染反应失调引起的危及生命的器官功效障碍 。脓毒症的发病机制很是重大，其中脓毒症引起的全身促炎反应是导致器官衰竭和殒命的要害因素之一 。近年研究发明，多种肠道菌群加入脓毒症疾病的爆发和希望 。嗜黏卵白阿克曼菌（Akkermansia muciniphila, AKK) 被以为是一种功效性益生菌菌株，对许多疾病的希望具有�；ぷ饔�；然而，AKK是否加入脓毒症的发病机制尚不清晰 。 2023年8月，南方医科大学基础医学院陈鹏、姜勇团队、珠江医院周雄伟团队及中国科学手艺大学段屹团队配合在《Gut》（IF=24.5）在线揭晓题为“Novel tripeptide RKH derived from Akkermansia muciniphila protects against lethal sepsis”的研究论文 。此研究发明AKK菌能够爆发一种新型三肽RKH，可能作为一种新的内源性TLR4拮抗剂，预防致死性脓毒症 。在乐成地将其疗效转化为临床实践后，RKH可能作为一种新的潜在治疗要领来对抗致命性脓毒症 。该研究拓展了AKK的病理心理功效，为临床治疗致死性脓毒症提供了一种新的潜在治疗要领 。 图片泉源：《Gut》 （https://gut.bmj.com/content/early/2023/08/11/gutjnl-2023-329996.long） 研究质料 小鼠：雄性C57BL/6小鼠，无菌（germ free）小鼠（赛业生物提供），TLR4-/-小鼠； 猪：巴马猪； 细胞：小鼠骨髓泉源的巨噬细胞（BMDMs），THP-1细胞，病人外周血诱导分解的巨噬细胞等 。 研究质料 测序手艺：16S-rRNA测序，2b-RAD-M测序，高通量转录组测序，非靶向代谢组学检测手艺； 通例实验手艺：qRT-PCR，卵白免疫印迹，组织HE染色，ELISA，血清损伤指标检测，流式细胞分选及剖析手艺，DNA凝胶电泳手艺等； 其他手艺：靶向定量手艺，分子对接，外貌等离子共振手艺，酶解和热稳固实验，免疫共沉淀等 。 手艺蹊径 01 AKK和脓毒症关联的研究：脓毒症患者和脓毒症小鼠的肠道AKK品貌均下降，提醒AKK水平与脓毒症相关，且仅依赖于活AKK 02 AKK改善脓毒症的有用因素剖析：活AKK爆发新型三肽RKH加入脓毒症预防，RKH处置惩罚可以预防脓毒症小鼠致命性脓毒症的爆发 03 RKH预防脓毒症机制的挖掘：RKH通过靶向团结TLR4并阻止TLR4激活，来预防脓毒症引起的全身炎症而施展作用 04 RKH治疗脓毒症的临床转化探索：RKH降低脓毒症巴马猪模子殒命率、减轻全身炎症和器官损伤，并负向调理脓毒症患者泉源巨噬细胞的促炎活性. 研究效果 1.肠道AKK菌加入人类和小鼠脓毒症希望 首先，研究职员对假手术和盲肠结扎穿刺法（CLP）构建的脓毒症小鼠的粪便举行了2bRAD-M测序，以探索肠道微生物群与脓毒症爆发和生长之间的潜在联系 。 在种水平上，与假手术组相比，CLP组的粪便中AKK品貌降低（图1 A），随后荧光定量PCR检测中小鼠粪便中AKK的相对品貌也验证这一发明（图1 B） 。主要的是，与小鼠模子一致，如图1 C所示，61份脓毒症患者粪便样本的AKK品貌显着低于27份比照样本 。为了剖析AKK在脓毒症希望中的作用，作者将高AKK和低AKK两组人类粪便移植到受体小鼠中并举行CLP手术 。有趣的是，接受高AKK品貌粪便的小鼠的存活时间往往略高于接受低AKK的小鼠（图1 E），只管其他细菌也可能加入脓毒症的希望，但这些数据批注，AKK细菌至少在一定水平上施展了�；ぷ饔� 。因此，肠道AKK水平可能加入脓毒症的希望 。 2.活AKK能够�；ぶ滤佬耘Ф局⑿∈� 接下来，为了确定AKK对脓毒症的直接影响，作者用PBS、活AKK或死AKK处置惩罚小鼠，然后举行假手术或CLP手术 。图1 F-H提醒，活AKK，而不是灭活AKK可以减轻脓毒症引起的器官损伤和致死性 。上述数据批注，AKK的�；ぷ饔每赡苋【鲇诨钕妇⒌纳锘钚晕镏� 。然后，作者评估了来自活AKK的作育上清液是否能缓解脓毒症 。图1 I-K提醒，与比照相比，自活AKK的作育上清液可以减轻脓毒症引起的器官损伤和致死性 。LPS诱导的脓毒症模子中的数据同样验证了上述看法（图1 L-O） 。总之，这些发明清晰地批注，活的AKK可能通过爆发�；ば晕镏�，在小鼠模子中有用地拯救了致命性脓毒症 。 图1 肠道AKK在小鼠模子中对致命性脓毒症具有�；ぷ饔肹1] 3.活AKK爆发新型的三肽Arg-Lys-His（RKH） 为了进一步探索活AKK渗透的�；ば晕镏�，作者对空缺作育基和活AKK作育基的作育上清液举行了非靶向代谢组学剖析，发明一种新的三肽RKH在活的AKK上清液中显著富集，并在非靶向代谢组学剖析中体现出最大的倍数转变（图2 C-D） 。靶向验证展现RKH在活AKK作育基显著高表达（图2 E），且在脓毒症病人中RKH含量显著下降（图2 H） 。 主要的是，作者引入赛业生物提供的无菌（germ free）小鼠并对其举行AKK菌定植，发明AKK菌定植组小鼠中血浆和盲肠内容物RKH含量显著回升（图2 F-G） 。为了探索RKH对致命性脓毒症的潜在治疗作用，在CLP手术前/ LPS注射前给小鼠服用RKH，效果提醒（图2 I-O），AKK活性产品RKH可以在小鼠模子中预防致命性脓毒症 。 图2 活AKK爆发的Arg-Lys-His（RKH）对小鼠致命性脓毒症的�；ぷ饔肹1] 4.RKH预防脓毒症引起的系统性炎症 就细胞因子风暴而言，系统性炎症是脓毒症发病时代殒命的主要因素之一 。作者对Sham比照组，CLP组以及CLP+RKH处置惩罚组的小鼠腹腔灌洗液举行转录组学剖析 。效果显示RKH处置惩罚后，与CLP组相比其中全基因表达爆发改变，且其中的炎症因子体现下降趋势（图3 A-B） 。进一步的，研究职员发明活AKK，AKK作育上清以及RKH处置惩罚能够显着降低系统性炎症反应以及腹腔巨噬细胞富集（图3 C-G） 。别的，细胞体外刺激的效果显示RKH能够降低LPS诱导的多种巨噬细胞促炎反应 。综上，RKH可能通过抑制脓毒症引起的系统性炎症施展�；ぷ饔� 。 图3 RKH预防脓毒症引起的系统性炎症反应[1] 5.RKH直接靶向TLR4并阻断TLR4激活 TLRs在脓毒症希望历程中对入侵病原体的系统反应起着主要作用 。图4 A-B提醒，RKH能够显著抑制巨噬细胞中TLR4下游的信号转导 。作者使用FITC荧光素标记的LPS处置惩罚巨噬细胞，发明RKH能够显著抑制LPS的团结（图4 C） 。团结上述效果，作者推测RKH能够与LPS竞争性团结TLR4，并通过外貌等离子共振手艺（图4 D），酶解实验（图4 E），热稳固实验（图4 F）和分子对接手艺（图4 I）验证了此看法 。 更主要的是，免疫沉淀（IP）实验的数据显示，RKH是通过抑制TLR4-MD2和TLR4-TLR4的二聚化来实现对TLR4下游信号转导的抑制（图4 G-H） 。别的，凭证分子对接效果提醒的RKH团结位点举行突变的实验效果提醒TLR4上的ARG264、LEU293、ASP294和LYS362可能是RKH抑制TLR4二聚的潜在功效团结位点 。最后，作者引入TLR4-/-小鼠对上述看法举行验证 。小鼠举行CLP手术后，RKH对生涯率，脏器损伤和系统性炎症反应没有�；ぷ饔� 。这些效果批注，RKH对致命性脓毒症的�；ぷ饔�，至少部分是通过抑制TLR4信号传导而爆发的 。 图4 RKH直接靶向TLR4并阻断TLR4激活[1] 6.RKH延伸脓毒症巴马猪模子的存活时间并镌汰太过炎症和器官损伤 为了进一步扩大RKH在临床上治疗脓毒症的潜力，作者接纳了巴马猪脓毒症大动物模子 。图5提醒，在巴马猪脓毒症模子中，RKH处置惩罚能够显著延永生涯率，降低血清中多种损伤指标，缓解多脏器损伤以及削弱炎症反应 。 图5 RKH延伸脓毒症巴马猪模子的存活时间并镌汰太过炎症和器官损伤[1] 7.RKH负调控脓毒症患者巨噬细胞的促炎活性 最后，为了进一步评估RKH对人类免疫细胞促炎活性调理的效力，从脓毒症患者中提取外周血单核细胞，并在体外分解为巨噬细胞 。图6 A提醒，RKH能够显著降低巨噬细胞IL-6的mRNA水平 。别的，RKH不影响脓毒症患者淋巴细胞正常功效（包括凋亡和细胞因子爆发） 。 图6 RKH负调控脓毒症患者巨噬细胞的促炎活性[1] 
研究结论
综上所述，该研究提供了脓毒症生长配景下宿主-微生物群落的相互作用的新证据 。作者通过展现活AKK爆发的一种新的生物活性三肽RKH，扩展了活AKK的病理心理作用 。若是在未来的临床实践中对脓毒症能够施展�；ぷ饔�，尤其是对处于高炎症状态的患者，RKH可能是致命性脓毒症的潜在有用治疗要领 。
原文检索：
[1]Xie S, Li J, Lyu F, Xiong Q, Gu P, Chen Y, Chen M, Bao J, Zhang X, Wei R, Deng Y, Wang H, Zeng Z, Chen Z, Deng Y, Lian Z, Zhao J, Gong W, Chen Y, Liu KX, Duan Y, Jiang Y, Zhou HW, Chen P. Novel tripeptide RKH derived from Akkermansia muciniphila protects against lethal sepsis. Gut. 2023 Aug 8:gutjnl-2023-329996. doi: 10.1136/gutjnl-2023-329996. Epub ahead of print. PMID: 37553229.
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