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摘要：抗癌药物毒性大，对情形有很大的危害 。本研究的目的是接纳一种立异的要领评估trabectedin对斑马鱼肝细胞系（ZFL）和胚胎幼虫的毒性 。在 ZFL 细胞中，使用 MTT 和台盼蓝扫除测定法丈量trabectedin的细胞毒性，并通过荧光激活细胞分选 (FACS) 和免疫荧光剖析评估细胞形态 。就殒命率/细胞活力而言，Trabectedin对ZFL细胞的毒性是斑马鱼胚胎幼虫的60倍，在42.7?g/L时视察到胚胎幼虫殒命， 0.04?g/L时视察到作育细胞无活力 。免疫荧光染色显示在0.04至0.15?g/L规模内袒露于trabectedin的ZFL细胞的形态学改变呈剂量依赖性. 别的，trabectedin在浓度低于50.3?g/L时会导致斑马鱼胚胎幼虫的形态异常，例如尾部畸形、心包水肿和缺乏平衡 。关于幼虫行为剖析，在漆黑条件下袒露于42.7?g/L的 trabectedin增添了斑马鱼的速率和总距离 。这些效果批注，trabectedin对体外和体内斑马鱼模子中都是有毒的，因此，这种抗癌剂在情形中的泛起和一连保存可能是生物群的一个潜在危害因素 。
要害词：抗癌剂 斑马鱼的运动行为 ZFL细胞 发育毒性 细胞毒性
简介：全天下有数以万万计的患者接受化疗，展望批注癌症病例数目将大幅增添，从而导致抗癌药物（AAs）的使用增添 。在给患者服用AAs后，由于废水处置惩罚厂对生涯和医院残留水的处置惩罚效果有限，AAs及其各自的代谢物会释放到情形中 。多项研究批注，AAs 保存于水生情形系统中，例如顺铂、依托泊苷、多柔比星、环磷酰胺和他莫昔芬，浓度规模为 0.22 至 86.2 ng/L，而在地下水中，AAs 的含量为 2.1 至 29.7 ng/L 。由于其作用机制通常包括与DNA的相互作用，AAs具有遗传毒性、致癌性、致突变性和/或致畸性，恒久接触的情形下可能会对水生生物爆发不良影响 。已检测到饮用水中保存 AA，置情形和人类康健于危险之中 。然而，水生情形中 AA 的保存及其对水生生物群和人类康健的影响尚未获得充分研究 。trabectedin用于治疗软组织肉瘤，于 2007 年进入欧洲市场，八年后进入美国市场 。分子通过团结DNA富含鸟嘌呤的特定序列，进而影响修复机制、转录调理和肿瘤微情形，从而维持其抗癌作用 。与在高浓度 下具有细胞毒性的典范 DNA 嵌插剂（例如替莫唑胺和铂化合物）差别，trabectedin在较低浓度下具有活性 。正在举行的研究和临床试验进一步批注，trabectedin对骨血瘤和结直肠肿瘤等其他类型的肿瘤有很好的治疗远景 �Ｋ剂康絫rabectedin在治疗计划中的使用越来越多，单独使用或与靶向治疗中的其他AAs团结使用，其在情形中已经保存的可能性很高 。因此，相识trabectedin在水生系统中的作用，相识其在情形中的长期性（半衰期）以及在水、污水污泥和废水中的检测值至关主要 。大大都现有研究涉及trabectedin对哺乳动物和非人类测试模子的影响，重点关注对人类康健的直接影响，旨在更好地相识这种药物的抗肿瘤潜力 。因此，关于trabectedin的情形危害的信息保存重大空缺 。文献中有关于AA对种种水生生物分类群的生态毒理学信息 。5-氟尿嘧啶在低于 0.1 mg/L的水平下诱导生长抑制. 接触顺铂21天会影响甲壳动物大型水蚤的滋生量，EC50值为16?g/L 。袒露于68?g/L环磷酰胺7天后会导致胚胎畸形 。Gajski等人使用斑马鱼肝（ZFL）细胞系、人类肝癌（HepG2）细胞和人类外周血淋巴细胞（HPBLs）来评估5-氟脲嘧啶、顺铂和足叶乙甙的毒性，并批注非靶向ZFL细胞比癌细胞更敏感 。AA 对非靶标生物和细胞的危害性增添，因此有须要探索trabectedin的生态毒理学潜力潜力 。本研究旨在深入相识trabectedin的情形毒性，从而更好地相识trabectedin在情形中的处置惩罚和疏散是否会影响淡水鱼类 。别的，本研究旨在建设体外细胞模子展望整体动物效应的可行性 。
trabectedin对 ZFL 细胞活力和形态的影响：trabectedin在 24、48 和 72 小时后对 ZFL 细胞具有强烈的细胞毒性，IC50 值见表1 。用作参比化合物的多柔比星在孵育 24、48 和 72 小时后的 IC50 值划分是视察到的trabectedin的 50、40 和 12 倍 。
表1、MTT法剖析trabectedin和多柔比星（阳性比照）对ZFL细胞的细胞毒性 。TB 剖析显示，与溶剂比照 (DMSO) 相比，所有测试浓度（0.04、0.08 和 0.15 ?g.L-1）的trabectedin导致 ZFL 细胞活力显著降低 。由于本研究中阴性比照组和溶剂比照组之间未视察到显著的统计学差别，因此选择溶剂比照组来较量腾博会官网数据 。举行 FACS 剖析以检查划分由 FCS 和 SSC 轴界说的单位巨细和内部重大性 。随着trabectedin浓度的增添，ZFL 细胞的直径和粒度均有所降低 。
图 1. TB 扫除法和流式细胞仪测定的 0.04、0.08 和 0.15 ?g.L-1 trabectedin对 ZFL 细胞活力的影响 。
为了进一步视察ZFL细胞的形态，对微管、F-肌动卵白和细胞核举行了免疫荧光染色 。其中一个最显著的影响是肌动卵白丝的漫衍 。比照细胞的外围有麋集的标记，但袒露于trabectedin的细胞中呈弥漫性取向 。这种改变在用最高浓度药物处置惩罚的细胞中获得了高度证实 。
图2、袒露24小时后，比照组和trabectedin处置惩罚的ZFL细胞的免疫荧光染色 。
对胚胎幼虫存活和发育的影响：trabectedin对斑马鱼胚胎幼虫的急性影响如表2和图3所示 。在袒露 trabectedin24 小时后导致殒命，LC50 为 95.5 ?g.L-1 。 在随后的接触天数中，殒命率增添，在 96 小时时 LC50 值为 77.55 ?g/L 。袒露于trabectedin还对胚胎幼虫造成亚致死效应，例如发育异常，包括体节改变、心包水肿、尾部畸形和缺乏平衡 。在24 hpf时，唯一可视察到的效应是体节改变，EC50为75.42?g/L 。袒露发明心包水肿，在24、48和96 hpf时EC50划分为66.28、74.66和75.42?g/L 。数值的增添并不料味着斑马鱼已经康复，而是意味着水肿鱼在随后的几天内殒命，从而导致丈量的亚致死效应显着降低 � ；故硬斓轿膊炕�，在72 hpf时畸形增强，EC50为42.66?g/L 。在 96 hpf 时发明幼虫缺乏平衡 。
图3、袒露于trabectedin的96 hpf斑马鱼幼虫的致畸显微照片
关于 96 小时的殒命率和畸形，LOEC 值（以视察到影响的最低浓度体现）为 42.66 ?g/L，而 NOEC 值（以未视察到影响的最高浓度体现）为22.47 ?g/L 。
Trabectedin对行为的影响: 在第一个漆黑时期视察到袒露于最高浓度trabectedin的幼虫的游泳速率和总距离显著增添 。在其他浓度和阶段，未视察到进一步的行为差别 。对应于斑马鱼运动行为的LOEC值为42.66?g/L，而NOEC抵达22.47?g/L 。
效果：本研究展现了抗癌剂trabectedin在相关的体外和体内生态毒理学，对斑马鱼的影响，从 ZFL 细胞系的细胞骨架因素到胚胎幼虫的发育和斑马鱼幼虫的运动 。本研究展现了抗癌剂trabectedin从ZFL细胞系的细胞骨架因素改变、胚胎幼虫的发育和幼虫的运动对斑马鱼的影响 。Trabectedin 是一种剧毒药物，对斑马鱼细胞（非靶细胞和正常细胞）的影响与肿瘤细胞相同 �Ｋ剂康絫rabectedin的普遍使用，这些研究效果支持了类似这项研究的须要性，以推断trabectedin的潜在情形危害 。斑马鱼细胞和胚胎的敏感性差别突出了斑马鱼细胞在镌汰不确定性和增进淡水系统� ；し矫娴那痹谟猛� 。在相关生态情形中斑马鱼幼虫胚胎细胞系系统是评估抗癌化合物毒性的合适工具 。
原文出自：Effects of trabectedin in the zebrafish Danio rerio: from cells to larvae - ScienceDirect
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