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Tamoxifen诱导Cre-ERT2小鼠|cre小鼠品系先容

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Cre-ERT2小鼠是一类含有雌激素受体(estrogen receptor ,ER)的配体团结区突变体(ERT)与Cre重组酶的融合卵白表达的小鼠 。Cre-ERT2在无Tamoxifen诱导的情形下 ,在细胞质内处于无活性状态;当Tamoxifen诱导后 ,Tamoxifen的代谢产品4-OHT(雌激素类似物)与ERT团结 ,可使Cre-ERT2进核施展Cre重组酶活性 。

Tamoxifen给药建议如下:

1. 他莫昔芬的设置和贮存他莫昔芬不溶于水 ,一样平常建议用玉米油消融:可凭证20mg/ml的终浓度举行设置 ,37℃摇晃住宿 。由于玉米油太多会导致他莫昔芬消融度变差 ,以是建议一次设置50mL以内的他莫昔芬溶液 ,设置完成后分装成1mL每管 ,-20℃避光生涯 ,使用时阻止重复冻融 ,正常半年内都是可以使用的 。别的 ,他莫昔芬对光敏感 ,在制备和贮存历程中需要注重避光处置惩罚 。

他莫昔芬和玉米油的品牌较多 ,我们常用的如下 ,仅作参考:

Tamoxifen?(Sigma‐Aldrich):CAS # 10540-29-1?

玉米油 (Sigma‐Aldrich) CAS# 8001-30-7

2. 他莫昔芬的给药剂量及频次

关于成年小鼠(4周龄以上) ,他莫昔芬的推荐剂量为75mg/kg-120mg/kg 。120mg/kg是我们现在使用较量普遍的一个剂量 ,一样平常注射3-5次(我们常用5次) ,隔天一次;75mg/kg是我们做过的最低剂量 ,可是给药需要一连5次 。幼鼠剂量可以降到100mg/kg 。孕鼠及老龄鼠(大于6月龄)的剂量也需要适当镌汰 。

3. 他莫昔芬的给药方法

他莫昔芬可以通过腹腔注射、灌胃、饮食或饮水等途径给药 ,应用最普遍的是腹腔注射给药 ,腹腔注射的给药剂量精准 ,便于控制 。

腹腔注射给药流程:准确抓取小鼠 ,将小鼠的鼻子朝向地面 ,露出腹部;定位动物的中线并将腹部分成四个象限 ,特殊是动物的右下象限 ,是腹腔注射的合适位置(右下象限缺少主要的剖解结构);多次腹腔注射时 ,应交替注射部位 。

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注:Tamoxifen会影响胎儿发育和生产 ,孕鼠诱导的时间只管选择孕晚期 ,并同时注射孕酮来镌汰流产概率 。

灌胃给药的给药剂量和频率与腹腔注射相同 ,在正式实验前 ,建议同砚们先重复训练 ,熟练掌握灌胃给药的技巧 。

饮食/饮水给药使用较少 ,主要是他莫昔芬水溶性差 ,小鼠的给药剂量欠好量化 ,且需要的诱导时间较长(一样平常需要几周举行诱导) ,在诱导时代往往还陪同着小鼠体重的下降(约10-15%) 。

4. 注重事项

A. 他莫昔芬注射完成后不建议连忙开展实验 ,一样平常来讲 ,停药后需要继续饲养7天 ,再安排后续实验 。

B. 比照组小鼠需要同步举行不含他莫昔芬的玉米油溶液给药 。

C. 未处置惩罚的小鼠需要和注射他莫昔芬的小鼠分笼饲养 ,小鼠舐舔到他莫昔芬悬液 ,梳毛等行为可能导致意外敲除 。

D. 加热不会导致Tamoxifen失效 ,37℃住宿消融他莫昔芬是没有问题的 。

最后 ,差别的实验计划、差别的小鼠品系、差别的组织器官等关于给药剂量、给药频率和给药方法等的要求往往是差别的 ,因此 ,上述要领只是一个参考 ,面临详细实验时 ,同砚们还应凭证参考文献、实验履历先举行预实验 ,以确定最佳计划 。

参考文献:Feil S, Valtcheva N, Feil R. Inducible Cre mice. Methods Mol Biol. 2009;530:343-63.  doi: 10.1007/978-1-59745-471-1_18. PMID: 19266339.

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