Cre-ERT2小鼠是一类含有雌激素受体(estrogen receptor,ER)的配体团结区突变体(ERT)与Cre重组酶的融合卵白表达的小鼠。Cre-ERT2在无Tamoxifen诱导的情形下,在细胞质内处于无活性状态;当Tamoxifen诱导后,Tamoxifen的代谢产品4-OHT(雌激素类似物)与ERT团结,可使Cre-ERT2进核施展Cre重组酶活性。
Tamoxifen给药建议如下:
1. 他莫昔芬的设置和贮存他莫昔芬不溶于水,一样平常建议用玉米油消融:可凭证20mg/ml的终浓度举行设置,37℃摇晃住宿。由于玉米油太多会导致他莫昔芬消融度变差,以是建议一次设置50mL以内的他莫昔芬溶液,设置完成后分装成1mL每管,-20℃避光生涯,使用时阻止重复冻融,正常半年内都是可以使用的。别的,他莫昔芬对光敏感,在制备和贮存历程中需要注重避光处置惩罚。
他莫昔芬和玉米油的品牌较多,我们常用的如下,仅作参考:
Tamoxifen?(Sigma‐Aldrich):CAS # 10540-29-1?
玉米油 (Sigma‐Aldrich) CAS# 8001-30-7
2. 他莫昔芬的给药剂量及频次
关于成年小鼠(4周龄以上),他莫昔芬的推荐剂量为75mg/kg-120mg/kg。120mg/kg是我们现在使用较量普遍的一个剂量,一样平常注射3-5次(我们常用5次),隔天一次;75mg/kg是我们做过的最低剂量,可是给药需要一连5次。幼鼠剂量可以降到100mg/kg。孕鼠及老龄鼠(大于6月龄)的剂量也需要适当镌汰。
3. 他莫昔芬的给药方法
他莫昔芬可以通过腹腔注射、灌胃、饮食或饮水等途径给药,应用最普遍的是腹腔注射给药,腹腔注射的给药剂量精准,便于控制。
腹腔注射给药流程:准确抓取小鼠,将小鼠的鼻子朝向地面,露出腹部;定位动物的中线并将腹部分成四个象限,特殊是动物的右下象限,是腹腔注射的合适位置(右下象限缺少主要的剖解结构);多次腹腔注射时,应交替注射部位。
注:Tamoxifen会影响胎儿发育和生产,孕鼠诱导的时间只管选择孕晚期,并同时注射孕酮来镌汰流产概率。
灌胃给药的给药剂量和频率与腹腔注射相同,在正式实验前,建议同砚们先重复训练,熟练掌握灌胃给药的技巧。
饮食/饮水给药使用较少,主要是他莫昔芬水溶性差,小鼠的给药剂量欠好量化,且需要的诱导时间较长(一样平常需要几周举行诱导),在诱导时代往往还陪同着小鼠体重的下降(约10-15%)。
4. 注重事项
A. 他莫昔芬注射完成后不建议连忙开展实验,一样平常来讲,停药后需要继续饲养7天,再安排后续实验。
B. 比照组小鼠需要同步举行不含他莫昔芬的玉米油溶液给药。
C. 未处置惩罚的小鼠需要和注射他莫昔芬的小鼠分笼饲养,小鼠舐舔到他莫昔芬悬液,梳毛等行为可能导致意外敲除。
D. 加热不会导致Tamoxifen失效,37℃住宿消融他莫昔芬是没有问题的。
最后,差别的实验计划、差别的小鼠品系、差别的组织器官等关于给药剂量、给药频率和给药方法等的要求往往是差别的,因此,上述要领只是一个参考,面临详细实验时,同砚们还应凭证参考文献、实验履历先举行预实验,以确定最佳计划。
参考文献:Feil S, Valtcheva N, Feil R. Inducible Cre mice. Methods Mol Biol. 2009;530:343-63. doi: 10.1007/978-1-59745-471-1_18. PMID: 19266339.