目的 使用 CRISPR/ Cas9 基因编辑手艺构建糖原贮积症 0(GSD0)型斑马鱼疾病模子,研究该病的发病历程和机制。
要领 针对 gys1 和 gys2 基因各设计一个靶点,举行基因编辑和突变体筛选;使用 qPCR 手艺检测早期发育阶段和成鱼差别组织基因表达情形,通过 PAS 染色手艺检测糖原累积情形。
效果 获得了 gys1 和 gys2 基因各两种有用突变类型的 F2 纯合突变体,乐成构建了 GSD0 型斑马鱼疾病模子。 gys1- / -纯合子 F3 早期胚胎发育缓慢,48 hpf 内所有殒命,而 gys2- / -纯合子发育正常。 基因表达剖析显示,野生型斑马鱼早期发育阶段(0 ~ 125 hpf),gys1 和 gys2 的表达先下降后上升,受精卵时期表达最高;成鱼阶段,gys1 在心脏和肌肉组织中高表达, gys2 在肝中高表达。 PAS 糖原染色显示,与野生型相比,gys1- / -心脏和肌肉没有显着的糖原积累,gys2- / -肝没有显着的糖原积累。
结论 gys1和gys2基因敲除斑马鱼模子的表型与小鼠模子相似,但也保存差别;Gys1敲除小鼠模子中 F2 大部分纯合子殒命,斑马鱼gys1-/-纯合子F2正常生长发育,而自交爆发的F3不可存活。 斑马鱼 gys1 和 gys2 敲除突变体的制备,为进一步研究人类糖原贮存障碍GSD0的发病历程和机制提供了质料。
阅读原文：糖原贮积症0型斑马鱼疾病模子的构建及表型剖析.pdf
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